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蛋白质磷酸化位点鉴定概述

蛋白质磷酸化位点鉴定最常用的是多级质谱法，蛋白质经酶切消化后，用固相金属亲和吸附（IMAC）富集磷酸化肽段，通过一级质谱可发现与肽段理论值相差80Da（HPO3=80）的质谱峰，选取该峰进行二级质谱，肽段破碎过程中如果有98Da的中性丢失（H3PO4=98Da），则可确定发生了磷酸化。二级质谱同时可测定中性丢失的位点，即磷酸化位点。因此，用质谱鉴定磷酸化蛋白，不但可以知道蛋白是否磷酸化，而且可以确定磷酸化的位点。

技术服务优势

1、与传统的western鉴定磷酸化相比，通过质谱鉴定蛋白质的磷酸化位点可以定位到某个氨基酸；

  2、可以鉴定混合物中磷酸化位点。

 

蛋白质磷酸化位点质谱鉴定技术服务流程

1、磷酸化蛋白质样品的制备：利用磷酸化抗体免疫共沉淀沉淀磷酸化蛋白质、IMAC纯化磷酸化蛋白质、表达和纯化磷酸化蛋白质等方法；

  2、蛋白质的分离：纯化后的磷酸化蛋白质经过凝胶电泳分离后，割取磷酸化蛋白质条带后用胰蛋白酶酶切； 3、磷酸化位点的鉴定：质谱鉴定磷酸化位点； 4、实验报告提交。

 

技术服务内容

1、磷酸化化蛋白质的分离、纯化、割取和酶切；

2、质谱分析、数据库检索； 3、提交质谱鉴定蛋白质磷酸化位点实验报告。

 

顾客提供

1、纯化后的磷酸化蛋白质；

2、单一蛋白质鉴定磷酸化位点需提供蛋白质相关背景信息，如NCBI登录号等。

 

实验报告内容

1、质谱鉴定蛋白质磷酸化位点的原始数据及分析结果；

2、实验技术服务所需试剂耗材、仪器设备、实验方法各一份。

 

实验周期及收费标准

咨询本公司QQ/电话：400 699 1663 

 

质量承诺

确保鉴定出的磷酸化位点定位到氨基酸。