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点击图片查看原图| 技术概述 RNA pull down是体外研究RNA与蛋白互作的重要技术。该技术通过体外转录靶RNA的一部分或全长，用生物素标记转录产物，再与蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素磁珠结合，从而把靶RNA结合蛋白从蛋白提取液中分离出来。复合物从磁珠上洗脱下来，通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与靶RNA结合；通过质谱仪检测，可以筛选到与靶RNA结合的蛋白。 技术原理 生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度**的非共价作用；其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后，利用生物素和链霉亲和素之间的亲和作用，可以纯化出各种生物大分子复合物。 RNA pull down实验是用生物素标记体外转录的靶RNA分子，再用链霉亲和素纯化出与靶RNA结合的蛋白复合体，洗脱得到RNA结合蛋白质。 技术应用 靶RNA结合蛋白的验证或筛选。 技术流程 
 参考文献 1.Identification of RNA-Protein Interactions Through In Vitro RNA Pull-Down Assays. Methods MolBiol 1480:99-113(2016). 2.The long noncoding RNA ASNR regulates degradation of Bcl-2 mRNA through its interaction with AUF1. Sci Rep 6:32189 (2016). 3.Silencing of the mRNA-binding protein HuR increases the sensitivity of colorectal cancer cells to ionizing radiation through upregulation of caspase-2. Cancer Lett 393:103-112(2017). |
