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BioRad伯乐PCR仪故障维修检测排查指南：BioRad伯乐PCR仪中的常见问题主要与反应条件、序列准确性以及扩增产率和特异性有关。在分子从mRNA分子模板合成DNA后，必须设计PCR程序来扩增目的，并添加其他元素，如限制性位点或检测或纯化标签。基因序列的内在特性，如高GC含量、相同多核苷酸的长段以及编码发夹环结构的序列都可能影响Bio-Rad伯乐PCR仪的使用效率。使用下面的故障排查指南来确定Bio-Rad伯乐PCR仪失败的原因及应对方法。

BioRad伯乐PCR仪检出率低

1）PCR循环次数不足：将Bio-Rad伯乐PCR仪循环次数增加5个。

2）Bio-Rad伯乐PCR仪模板已降级：使用电泳检查DNA质量。

3）模板被PC抑制剂污染：1.检查260和280nm处的DNA吸光度比。纯DNA的260/280比例应为≥1.8。2.在反应中使用较少体积的模板。3.使用DNA纯化试剂盒沉淀去除 污染物。

4）热循环仪程序退火和延伸温度：1.遵循PCR设计的一般规则：退火温度=引物Tm – 5°C，延伸温度=72°C。2.逐步将退火温度降低6至10°C 。

5）反应缺少Taq聚合酶或其他反应组分：确保将每种组分添加到PCR反应中。

6）Bio-Rad伯乐PCR仪引物浓度过低：检查引物浓度；如有必要，增加注意力。

7）靶标序列不在DNA模板中：1.从源头重新提取脱氢酶。2.测试模板的另一个区域。

8）Bio-Rad伯乐PCR仪模板不足：增加DNA模板的浓度。

9）Bio-Rad伯乐PCR仪反应组分浓度不理想：检查推荐的引物浓度（通常从 0.05-1毫摩尔）和毫克++浓度（通常为0.2-1毫摩尔）。

10）反应混合物组分受损：1.检查组件的到期日期。2.等分试反应混合物的生物成分，避免多次冻融循环。

11）引物设计不理想（导致非特异性退火或引物二聚体形成）：1.遵循底漆设计的一般规则：长度为18-30 核苷酸，GC含量在40-60%之间，引物Tm在5°C以内彼此。2.避免拉伸4个或更多相同的核苷酸或 二核苷酸重复。3.避免引物中的自互补序列。

选择我们在Bio-Rad伯乐PCR仪维修领域的知识将确保为您提供节省成本的维修服务。拥有有一批经验丰富，技术维修工程师，二十四小时在线随时为您分析解决维修问题。

BIORADpcr基因扩增仪适用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、遗传学表达等领域以聚合酶链式反应为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及分析。

Bio-Rad扩增仪的日常维护保养工作

样品池的清洗

先打开盖子，然后用10%清洗液浸泡样品池5min，然后清洗被污染的孔；用微量移液器吸取液体，用棉签吸干剩余液体，设定保持温度为50的PCR程序并使之运行，让残余液体挥发去除，一般5～10min即可。

热盖的清洗

对于荧光定量基因扩增仪，当有荧光污染出现，而且这一污染并非来自样品池时，或当有污染或残迹物影响到热盖的松紧时，需要用压缩空气或纯水清洗垫盖底面，确保样品池的孔干净，无污物阻挡光路。

仪器外表面的清洗

清洗基因扩增仪的外表面可以除去灰尘和油脂，但达不到消毒的效果，选择没有腐蚀性的清洗剂对基因扩增仪的外表面进行清洗。

光路系统

定期清洁：光路系统是仪器的核心部分，灰尘等污染物会影响荧光信号的传输和检测，需根据使用频率，每 1-3 个月用专用的光学清洁液和无尘擦拭布轻轻擦拭激发光源、滤光片、透镜等光学元件，去除灰尘和污垢，确保光路通畅和光信号的准确性。

避免强光直射和震动：仪器应放置在避免阳光直射和远离大型电机、离心机等震动源的地方，防止光路系统的部件发生移位或损坏，影响荧光检测的准确性和稳定性。

热循环系统

检查温度准确性：定期（一般每半年）使用标准温度传感器对热循环模块的温度进行校准和验证，确保各孔间的温度均匀性和准确性在规定范围内，以保证 PCR 反应的特异性和扩增效率。

清洁热循环模块：每次实验结束后，及时清理热循环模块表面的杂物和冷凝水，防止其进入仪器内部造成短路或腐蚀。定期（每 3-6 个月）打开仪器外壳，对热循环模块的散热风扇、加热元件等进行清洁，去除灰尘和积尘，保证散热良好，防止过热损坏。

检查密封性：定期检查样品槽的密封性，确保在热循环过程中不会发生液体泄漏。若发现密封垫老化或损坏，应及时更换，以免影响实验结果和损坏仪器。

Bio-Rad QPCR仪常见注意事项

什么是背景校正多长时间执行一次背景校正？

　　背景校正程序测量定量PCR仪所使用的反应管和水的空白荧光强度。在运行校正程序期间，定量PCR仪在10分钟内连续读取背景校正板的荧光强度，信号收集的温度为60°C。随后，SDS软件计算所收集到的荧光强度的平均值，提取结果并保存到校正文件中。软件在今后的分析中将自动调用此校正文件，从实验数据中扣除背景信号。

　　因为背景荧光的信号强度随着许多外界因素（比如外来的污染、反应板/反应管的生产厂商不同、水的纯度等）而变化，所以推荐定期进行背景校正，一般每三个月到半年校正一次。

2.哪些种类的反应管和盖子适合定量PCR实验使用？有何需要注意的地方？ 

　　定量PCR实验可以使用以下耗材：96孔光学反应板配合光学膜，0.2 ml光学八联反应管配合光学膜，0.2 ml光学八联反应管配合平盖的光学八联管盖。

3.为什么要定期对电脑进行磁盘碎片整理？怎样整理？

　　当运行实时定量PCR仪及使用软件分析实验结果时，计算机会删除并创建若干文件，计算机硬盘空闲空间会被分割成越来越多的小块。当硬盘驱动器上文件以分解的碎片存储时，程序需要更长的时间才能存取文件，因为必须多次寻找文件碎片以存取不同的片断。碎片整理实用程序将一个文件分解开的多个碎片合并在一起，并存储到硬盘的同一个位置，从而清除文件碎片，进而优化系统性能。

碎片整理的方法如下：

· 在Windows桌面上，选择开始(start)，我的电脑(My computer)。

· 在(我的电脑)窗口中，用鼠标右键单击硬盘驱动器，并选择(属性)property。

· 在(属性)对话框中选择工具(Tools)选项卡，单击开始整理(Defragment now)。

· 单击碎片整理(Defragment)。

· 当显示“碎片整理完毕”对话框时，单击（确定）。

· 在“本地磁盘属性”对话框中，单击（确定）。

· 为计算机机中剩余的驱动器重复如上步骤。

伯乐BioRadPCR仪维修及故障解决。

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