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细菌蛋白提取试剂盒（100次）

● 产品货号及规格

● 产品简介

细菌蛋白提取试剂盒使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎等复杂的操作步骤，有效避免了外源蛋白的污染。该试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制剂混合物，可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的粘稠现象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP、Western blot实验，也可直接通过Ni-NTA 等纯化填料进行蛋白纯化。该试剂盒既可适用于小量蛋白表达检测，也适用于大量蛋白的表达纯化试验；既适用于纯化可溶型蛋白，也适用于纯化包涵体蛋白。

每次提取使用1ml 缓冲液计算，该试剂盒可以使用100次。

●    使用方法：

一 可溶型蛋白操作方法（1 ml菌液为例）

1. 8,000rpm常温离心 3min 后，弃上层培养基，留取管底部菌体（尽量弃除掉培养基） 。

2. 加入 200 μl细菌蛋白提取液，2 μl DNase I和4 μl 溶菌酶重悬菌体，用吸头吹打至无可见细胞团块。

3. 置于常温孵育 10-15min，期间轻弹离心管数次以加速裂解。

4. 裂解完成后 13,000rpm 于4℃离心5 min，将上清转移至新的容器中，溶液可直接进行下一步纯化或检测试验。

 二 包涵体蛋白操作方法（1 ml菌液为例）

1. 上述步骤4 中，弃上清，保留沉淀组分，用200 μl 的细菌蛋白提取液重悬沉淀。

2. 加入4μl溶菌酶，混合均匀，常温孵育 10-15 min。

3. 加入 800 μl 的灭菌水混合均匀。

4. 13,000 rpm常温离心5min，弃上清后用 900 μl 灭菌水重悬沉淀，然后加入 200 μl 细菌蛋白提取液，混合均匀。

5. 13,000rpm 室温离心5 min，重复步骤4 三至五次。

6. 将沉淀溶解于变性溶液中，进行下一步纯化或复性试验。